Cryoconservation des échantillons biologiques issus des soins : objectifs, étapes et limites

La cryoconservation, aussi appelée cryopréservation, consiste ici à conserver à basse température des tissus, des cellules ou des liquides biologiques prélevés au cours des soins. [1] Son objectif est de préserver la qualité de l’échantillon pour permettre ultérieurement des analyses à visée diagnostique, pronostique ou d’orientation thérapeutique. [1] Il ne s’agit donc ni d’une maladie ni d’un traitement, mais d’un ensemble d’opérations de laboratoire comprenant notamment la préparation, le conditionnement, la congélation, le stockage, le transport et la décongélation éventuelle d’un prélèvement. [1] La conservation des gamètes ou des embryons en assistance médicale à la procréation, la transfusion sanguine, les greffons, les prélèvements post mortem et la recherche ne sont pas couverts par le document français utilisé pour cette fiche. [1] Les repères techniques présentés ici proviennent de recommandations de la HAS élaborées en septembre 2009, fondées généralement sur des études de faible niveau de preuve ou, en l’absence de données publiées, sur un accord professionnel. [1]

Quels prélèvements peuvent être concernés ?

La cryoconservation peut concerner des tissus, des cellules et différents liquides biologiques recueillis chez une personne vivante dans le cadre de ses soins. [1] Parmi les liquides cités figurent notamment le sang, le sérum, le plasma, les urines et le liquide céphalo-rachidien. [1] La méthode de préparation dépend de la nature du prélèvement, de la molécule recherchée et de la technique d’analyse prévue. [1] Une même procédure ne convient donc pas indistinctement à tous les tissus, à toutes les cellules et à tous les liquides biologiques. [1]

Comment un échantillon est-il préparé et congelé ?

La prise en charge de l’échantillon commence dès la biopsie, la ponction, l’exérèse ou l’autre geste ayant permis son recueil. [1] Le délai entre le prélèvement et la congélation doit être connu et aussi bref que possible, car certaines molécules, notamment les ARN, se dégradent rapidement. [1] Les manipulations doivent suivre des procédures écrites et protéger le prélèvement contre les contaminations ou les dégradations. [1] Le conditionnement est réalisé par du personnel formé dans des récipients adaptés au froid et identifiés de manière durable. [1] Lorsqu’un tissu est prélevé pour établir un diagnostic, une partie représentative doit rester disponible pour le contrôle anatomopathologique afin que la congélation ne compromette pas le diagnostic. [1]

Pourquoi les conditions de conservation varient-elles ?

Les procédés de cryoconservation sont choisis en fonction de l’utilisation future, par exemple selon qu’il faut préserver la structure des molécules ou la viabilité de cellules. [1] Pour les cellules et les tissus, les recommandations indiquent une conservation à long terme en dessous de −70 °C, avec une température optimale de −196 °C lorsqu’il faut conserver des cellules viables. [1] Pour les liquides biologiques, les modalités couramment décrites vont d’une congélation à −20 °C pour une courte période à une conservation à −80 °C sur le long terme. [1] Ces températures ne constituent pas une consigne universelle, car la méthode doit rester adaptée au type d’échantillon et à la finalité de sa conservation. [1]

Comment la qualité et l’identité du prélèvement sont-elles préservées ?

La traçabilité doit permettre de suivre l’échantillon, les données associées, les intervenants et les événements survenus depuis le prélèvement jusqu’à son utilisation. [1] Une fiche de transmission précise notamment l’identité du patient, les opérateurs concernés, les conditions de transport, les horaires et les éventuelles non-conformités. [1] La température de stockage doit être surveillée en continu, enregistrée et associée à des alarmes ainsi qu’à un dispositif de secours en cas de défaillance. [1] Les procédures, contrôles de qualité et non-conformités doivent être documentés, car les conditions antérieures à l’analyse peuvent influencer la fiabilité du résultat final. [1]

Que se passe-t-il lors du transport ou de la décongélation ?

Le transport d’un échantillon congelé doit préserver son intégrité, maintenir la chaîne du froid et protéger les personnes contre les risques liés au prélèvement. [1] La décongélation suit un protocole défini, car cette étape influence l’intégrité quantitative et qualitative des molécules conservées. [1] La recongélation d’un échantillon déjà décongelé n’est pas recommandée dans ce document. [1] Si plusieurs cycles de congélation et de décongélation sont néanmoins nécessaires, ils doivent être tracés et archivés. [1]

Quelles sont les limites de la cryoconservation ?

La congélation ne suffit pas, à elle seule, à garantir qu’un prélèvement conviendra à toute analyse future. [1] La qualité finale dépend aussi du recueil, du délai avant congélation, de la préparation, du conditionnement, du transport, du stockage et de la décongélation. [1] Pour un prélèvement tissulaire destiné à une analyse, un contrôle microscopique préalable est essentiel afin de vérifier que l’échantillon contient bien la lésion recherchée et qu’elle n’est pas nécrosée. [1] Les opérations techniques relèvent de professionnels formés et de procédures de laboratoire, et non d’une manipulation autonome par le patient. [1]