Cytométrie en flux : principe, utilisations et interprétation

La cytométrie en flux est une technique de laboratoire qui mesure les propriétés physiques et chimiques de cellules circulant en suspension devant un faisceau laser. [1] Elle permet d’étudier rapidement de nombreuses cellules une par une, notamment pour reconnaître différentes populations cellulaires et rechercher les marqueurs qu’elles expriment. [1] Son application clinique la plus fréquente est l’immunophénotypage, c’est-à-dire la caractérisation des cellules au moyen de plusieurs marqueurs détectés par fluorescence. [1] [3]

Comment fonctionne la cytométrie en flux ?

Les cellules sont préparées en suspension puis guidées dans l’appareil afin de passer individuellement devant le laser. [1] La lumière diffusée renseigne notamment sur la taille et la complexité interne des cellules. [1] Des anticorps associés à des molécules fluorescentes peuvent se fixer sur des cibles cellulaires précises, appelées antigènes ou marqueurs. [1] Les signaux lumineux sont transformés en données numériques, puis représentés sous forme de graphiques permettant de délimiter et de comparer les populations cellulaires. [1]

Dans quelles situations cet examen est-il utilisé ?

En hématologie, la cytométrie en flux aide à identifier et à classer certaines leucémies en déterminant la maturité et la lignée des cellules anormales. [1] Elle peut également contribuer à caractériser des leucémies chroniques, des anomalies des plasmocytes et certains syndromes myélodysplasiques. [1] Après le traitement d’une leucémie, elle peut rechercher de très faibles proportions de cellules leucémiques résiduelles dans la moelle osseuse. [1] D’autres applications comprennent le comptage des lymphocytes T CD4 chez les personnes vivant avec le VIH et l’analyse de marqueurs utilisés pour diagnostiquer l’hémoglobinurie paroxystique nocturne. [1] La cytométrie en flux peut aussi quantifier certains marqueurs de surface, notamment sur les plaquettes, à condition que la méthode, les anticorps, les calibrateurs et l’instrument soient correctement standardisés. [2]

Quels échantillons peuvent être analysés ?

Le sang périphérique et les prélèvements de moelle osseuse sont les échantillons les plus couramment étudiés. [1] Selon la question médicale, l’analyse peut aussi porter sur un liquide biologique, une ponction à l’aiguille fine ou une suspension cellulaire provenant d’une biopsie récente. [1] La nature du prélèvement dépend donc de l’organe ou des cellules à étudier et de l’indication recherchée. [1]

Comment se déroule l’analyse au laboratoire ?

Après réception, l’échantillon est préparé avec des anticorps fluorescents choisis en fonction des cellules et des anomalies recherchées. [1] Pour rechercher des marqueurs situés à l’intérieur des cellules, une étape supplémentaire rend leur membrane perméable aux anticorps. [1] La fraîcheur, la conservation et le délai de traitement de l’échantillon influencent la qualité de l’analyse. [1] Le laboratoire a aussi besoin du diagnostic envisagé, des informations cliniques pertinentes, des examens associés et, lorsqu’ils existent, des précédents résultats de cytométrie. [1]

Comment interpréter le résultat et quelles sont ses limites ?

L’interprétation repose sur la combinaison des populations observées, de l’intensité des marqueurs et de témoins positifs et négatifs appropriés. [1] Un résultat de cytométrie en flux doit être replacé dans le contexte clinique et comparé aux autres données biologiques ou morphologiques disponibles. [1] En cas de suspicion de maladie hématologique, l’examen morphologique des cellules et la cytométrie sont généralement complémentaires. [1] Certaines cellules peuvent être perdues pendant la préparation, ce qui peut rendre les comptages différentiels moins précis. [1] Les résultats peuvent aussi varier selon la qualité de l’échantillon, l’étalonnage de l’appareil, les réactifs, les contrôles employés et la méthode d’analyse. [1] La standardisation est particulièrement importante pour comparer des mesures quantitatives entre plusieurs instruments, laboratoires ou moments du suivi. [2]