Caryométrie de l’ADN : principe, usages étudiés et limites

La caryométrie diagnostique de l’ADN est une technique de laboratoire qui associe une classification automatisée de la forme des noyaux cellulaires à la mesure de leur contenu en ADN. [1] Il ne s’agit ni d’une maladie ni d’un symptôme, mais d’une méthode destinée à analyser des cellules prélevées afin de rechercher des anomalies compatibles avec une transformation maligne ou d’étudier le grade de certaines cellules cancéreuses. [1] La publication disponible décrit principalement son évaluation sur des frottis buccaux, des épanchements séreux et des cellules de cancers de la prostate. [1]

Quelle différence avec la cytométrie de l’ADN ?

La cytométrie diagnostique de l’ADN évalue les noyaux à partir de la quantité d’ADN mesurée. [1] La caryométrie de l’ADN ajoute une analyse morphométrique, c’est-à-dire une classification fondée notamment sur la forme et les caractéristiques visuelles des noyaux. [1] Cette étape sert à distinguer les noyaux normaux, les noyaux morphologiquement anormaux, certaines cellules inflammatoires et les objets non interprétables tels que les noyaux superposés ou défocalisés. [1]

Quels prélèvements peuvent être analysés ?

La cytologie étudie des cellules provenant notamment de liquides biologiques, d’un brossage d’une muqueuse ou d’une ponction à l’aiguille fine. [1] Dans les travaux présentés sur la caryométrie automatisée, les échantillons comprenaient des frottis buccaux, des cellules d’épanchements séreux et des cellules séparées à partir de biopsies prostatiques. [1] Pour l’analyse automatisée décrite, les cellules doivent être réparties de façon suffisamment régulière et avec peu de superpositions sur la lame. [1] Les prélèvements liquides peuvent être concentrés sur une lame par cytocentrifugation, tandis que les cellules obtenues par brossage nécessitent une fixation et une préparation avant leur dépôt sur la lame. [1]

Comment se déroule l’analyse en laboratoire ?

Les cellules sont colorées avec une méthode spécifique de l’ADN, telle que la coloration de Feulgen utilisant la pararosaniline ou la thionine. [1] Un scanner équipé d’un microscope numérise ensuite la lame à plusieurs niveaux de mise au point. [1] Le logiciel classe les objets détectés en différentes catégories, notamment les noyaux normaux, les noyaux anormaux, les cellules inflammatoires et les artefacts. [1] Des noyaux considérés comme normaux servent de référence interne pour calibrer la quantité d’ADN mesurée. [1] Le contenu en ADN est ensuite mesuré dans les noyaux classés comme morphologiquement anormaux. [1]

L’automatisation ne supprime pas le contrôle humain de l’analyse. [1] Un opérateur qualifié doit vérifier les noyaux signalés comme anormaux et contrôler l’histogramme représentant leur contenu en ADN avant qu’un diagnostic cytopathologique soit rendu. [1]

Comment les résultats sont-ils interprétés ?

L’analyse recherche notamment une proportion accrue de noyaux morphologiquement anormaux et une répartition anormale de la quantité d’ADN appelée aneuploïdie. [1] Dans l’algorithme présenté, une proportion élevée de noyaux anormaux sert à signaler une suspicion de malignité. [1] La présence d’une aneuploïdie dans les noyaux morphologiquement anormaux est utilisée par les auteurs comme marqueur de cellules malignes. [1] Le seuil de noyaux anormaux permettant de faire naître une suspicion varie selon le tissu, la préparation de l’échantillon, la coloration et le classificateur informatique utilisé. [1] Un seuil évalué sur un type de prélèvement ne peut donc pas être présenté comme une règle universelle pour tous les organes ou toutes les techniques. [1]

Dans quelles situations la méthode a-t-elle été étudiée ?

Sur les frottis buccaux, l’objectif étudié était de repérer des cellules cancéreuses ou des lésions précurseurs dans des prélèvements obtenus par brossage. [1] L’évaluation du dispositif automatisé a porté sur 92 frottis de personnes atteintes d’anémie de Fanconi, une population présentant un risque élevé de cancer buccal. [1] Les auteurs indiquent que certaines analyses étaient faussement négatives, probablement en raison d’erreurs d’échantillonnage malgré un nombre suffisant de cellules sur plusieurs lames. [1]

Dans les épanchements séreux, la méthode a été évaluée pour rechercher des cellules cancéreuses parmi les cellules présentes dans le liquide. [1] Dans une série de 121 lames, la recherche automatisée d’aneuploïdie a obtenu une sensibilité de 76,4 % et une spécificité de 100 % pour la détection de cellules malignes. [1] Une sensibilité inférieure à 100 % signifie que la méthode n’a pas détecté tous les prélèvements contenant des cellules cancéreuses dans cette série. [1]

Dans le cancer de la prostate, la caryométrie de l’ADN a été étudiée pour établir un grade fondé sur la quantité d’ADN mesurée dans plusieurs milliers de noyaux cancéreux. [1] Les données pronostiques rapportées provenaient de 80 patients atteints d’un cancer prostatique de stade précoce et de score de Gleason 6 ou 7. [1] Ces résultats issus d’un effectif limité ne permettent pas d’étendre automatiquement les performances observées à tous les cancers de la prostate. [1]

Quelles sont les limites de la caryométrie de l’ADN ?

La qualité du résultat dépend du prélèvement, de la préparation de la lame, de la coloration, de la mise au point des images et de la classification correcte des noyaux. [1] Des noyaux anormaux peuvent être classés à tort comme des artefacts, tandis que certains artefacts peuvent être classés comme anormaux. [1] La vérification des images par un professionnel formé reste donc nécessaire avant toute conclusion diagnostique. [1] Les auteurs reconnaissent que le faible nombre d’échantillons étudiés avec la nouvelle technologie limite la représentativité des résultats. [1] Ils demandent des études portant sur des populations plus représentatives afin de mieux établir les performances diagnostiques et pronostiques de la méthode. [1]

Les résultats publiés sur ces applications particulières ne suffisent pas à présenter la caryométrie de l’ADN comme un test de dépistage général ou comme un remplacement autonome de l’examen réalisé par les professionnels de cytopathologie. [1]